ⅠNasidi ya ucleiciutangulizi
Asidi ya nyuklia imegawanywa katika asidi ya deoxyribonucleic (DNA) na asidi ya ribonucleic (RNA), kati ya ambayo RNA imegawanywa katika ribosomal RNA(rRNA), messenger RNA(mRNA) na uhamisho wa RNA(tRNA) kulingana na kazi zake tofauti.DNA imejilimbikizia hasa kwenye kiini, mitochondria na klorofomu, huku RNA ikisambazwa zaidi kwenye saitoplazimu.Kama msingi wa nyenzo wa usemi wa jeni, uchimbaji wa asidi ya nukleiki una jukumu muhimu sana katika utafiti wa baiolojia ya molekuli na uchunguzi wa kimatibabu wa molekuli.Mkusanyiko na usafi wa uchimbaji wa asidi ya nucleic utaathiri moja kwa moja PCR inayofuata, mlolongo, ujenzi wa vector, digestion ya enzyme na majaribio mengine.
Ⅱ Uchimbaji wa asidi ya nyuklia na njia ya utakaso
① Mbinu ya uchimbaji wa Phenoli/chloroform
Uchimbaji wa phenoli/klorofomu ni mbinu ya kitamaduni ya uchimbaji wa DNA, ambayo hutumia vimumunyisho viwili tofauti vya kikaboni kutibu sampuli, kuyeyusha asidi ya kiini ya DNA katika awamu ya maji, lipids katika awamu ya kikaboni, na protini kati ya awamu hizo mbili.Njia hii ina faida ya gharama nafuu, usafi wa juu na athari nzuri.Ubaya ni operesheni ngumu na ya muda mrefu.
② Mbinu ya Trizol
Njia ya Trizol ni njia ya classical ya uchimbaji wa RNA.Njia ya Trizol imegawanywa katika awamu ya maji na awamu ya kikaboni baada ya centrifugation na kloroform, ambayo RNA inafutwa katika awamu ya maji, awamu ya maji huhamishiwa kwenye tube mpya ya EP, mvua hupatikana baada ya kuongeza isopropanol, na kisha utakaso wa ethanol.Njia hii inafaa kwa uchimbaji wa RNA kutoka kwa tishu za wanyama, seli na bakteria.
③ Mbinu ya kusafisha safu ya katikati
Njia ya utakaso ya safu wima ya Centrifuge inaweza kutangaza DNA hasa kupitia nyenzo maalum za utangazaji za matrix ya silicon, wakati RNA na protini zinaweza kupita vizuri, na kisha kutumia chumvi nyingi za chini PH kuchanganya asidi nucleic, chumvi ya chini ya juu ya PH thamani elution kutenganisha na kusafisha asidi nucleic.Faida ni ukolezi wa juu wa utakaso, utulivu wa juu, hakuna haja ya kutengenezea kikaboni, na gharama ya chini.Hasara ni kwamba inahitaji kuwa centrifuged hatua kwa hatua, hatua zaidi za uendeshaji.
④ Mbinu ya shanga za sumaku
Mbinu ya shanga za sumaku ni kupasua sampuli ya tishu za seli kupitia lisati, kutoa asidi ya nukleiki kwenye sampuli, kisha molekuli za asidi ya nukleiki huwekwa kwenye uso wa ushanga wa sumaku, huku uchafu kama vile protini na sukari ukiachwa ndani. kioevu.Kupitia hatua za mgawanyiko wa tishu za seli, kuunganishwa kwa bead ya sumaku na asidi ya nucleic, kuosha asidi ya nucleic, asidi ya nucleic, nk, asidi safi ya nucleic hatimaye hupatikana.Faida ni operesheni rahisi na matumizi ya muda mfupi, bila ya haja ya hatua ya centrifugation.Ina mahitaji ya chini ya kiufundi na inaweza kutambua uendeshaji wa moja kwa moja na wingi.Mchanganyiko maalum wa bead ya sumaku na asidi ya nucleic hufanya asidi ya nucleic iliyotolewa na mkusanyiko wa juu na usafi.Ubaya ni kwamba bei ya sasa ya soko ni ghali.
⑤ Mbinu nyingine
Mbali na njia nne zilizo hapo juu, kuna ngozi ya kuchemsha, njia ya chumvi iliyokolea, njia ya sabuni ya anionic, njia ya ultrasonic na njia ya enzymatic, nk.
Ⅲ Aina ya uchimbaji wa asidi ya nucleic
Foregene ina jukwaa la Direct PCR linaloongoza duniani, jukwaa la Kutenga la RNA lenye safu wima mbili (DNA-pekee + RNA pekee ).Bidhaa kuu ni pamoja na vifaa vya kutengwa vya DNA/RNA, PCR na vitendanishi vya moja kwa moja vya PCR mfululizo wa vitendanishi vya maabara.
① Jumla ya uchimbaji wa RNA
Jumla ya sampuli za uchimbaji wa RNA ni pamoja na damu, seli, tishu za wanyama, mimea, virusi, nk. Usafi wa juu na mkusanyiko wa juu wa jumla wa RNA unaweza kupatikana kupitia uchimbaji wa jumla wa RNA, ambayo inaweza kutumika katika RT-PCR, uchambuzi wa chip, tafsiri ya vitro, cloning ya molekuli, Dot Blot na majaribio mengine.
Kuhusiana na ForegeneVifaa vya Kutengwa vya RNA
Seti ya Kutenga ya RNA ya Wanyama--Haraka na kwa ufanisi toa jumla ya RNA yenye ubora wa juu na wa hali ya juu kutoka kwa tishu mbalimbali za wanyama.
Seli Jumla ya Seli ya Kutenga ya RNA--Jumla ya RNA iliyosafishwa sana na ya ubora wa juu inaweza kupatikana kutoka kwa seli mbalimbali za utamaduni katika dakika 11.
Seti ya Kutenga ya Jumla ya RNA ya mmea--Chambua kwa haraka jumla ya RNA ya ubora wa juu kutoka kwa sampuli za mmea zilizo na polisakaridi na maudhui ya poliphenoli kidogo.
Seti ya Kutengwa ya RNA ya Virusi--Tenga na safisha kwa haraka RNA ya virusi kutoka kwa sampuli kama vile plasma, seramu, vimiminika vya mwili visivyo na seli na viambata vya juu vya seli.
② Uchimbaji wa DNA ya Genomic
Sampuli za uchimbaji wa DNA ya genomic ni pamoja na udongo, kinyesi, damu, seli, tishu za wanyama, mimea, virusi, n.k. Uchimbaji wa DNA ya Genomic inaweza kutumika katika usagaji wa kimeng'enya, ujenzi wa maktaba ya DNA, PCR, utayarishaji wa kingamwili, uchanganuzi wa mseto wa Magharibi, chipu cha jeni, juu. -mfuatano wa matokeo na majaribio mengine.
Kuhusiana na ForegeneSeti za Kutenga za DNA
Seti ya Kutenga ya DNA ya Tishu za Wanyama--Uchimbaji wa haraka na utakaso wa DNA ya jeni kutoka kwa vyanzo vingi, kama vile tishu za wanyama, seli, n.k.
Seti ya Midi ya DNA ya Damu (1-5ml)--Osha kwa haraka DNA ya jeni ya ubora wa juu kutoka kwa damu isiyoganda (1-5ml).
Seti ya Kutenga ya Kadi ya Buccal Swab/FTA--Safisha kwa haraka DNA ya jeni ya ubora wa juu kutoka kwa sampuli za Kadi za FTA.
Seti ya Kutenga ya DNA ya mmea--Safisha kwa haraka na upate DNA ya jeni ya ubora wa juu kutoka kwa sampuli za mimea (ikiwa ni pamoja na polysaccharides na sampuli za mimea ya polyphenoli)
③ Uchimbaji wa Plasmidi
Plasmid ni aina ya molekuli ndogo ya mviringo ya DNA katika seli, ambayo ni carrier wa kawaida wa ujumuishaji wa DNA.Mbinu ya uchimbaji wa plasmid ni kuondoa RNA, kutenganisha plasmid kutoka kwa DNA ya bakteria ya genomic, na kuondoa protini na uchafu mwingine ili kupata plasmid safi kiasi.
Jenerali Plasmid Mini Kit--Safisha kwa haraka DNA ya plasmid ya ubora wa juu kutoka kwa bakteria iliyobadilishwa kwa majaribio ya kawaida ya baiolojia ya molekuli kama vile mabadiliko na usagaji wa vimeng'enya
④ Aina zingine za uchimbaji, uchimbaji wa miRNA, n.k.
Seti ya kutengwa ya miRNA ya wanyama--Ondoa kwa haraka na kwa ufanisi vipande vidogo vya RNA vya 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA kutoka kwa tishu na seli mbalimbali za wanyama.
Ⅳ Mahitaji ya uchimbaji wa asidi ya nucleic na matokeo ya utakasos
① Kuhakikisha uadilifu wa muundo msingi wa asidi nucleic.
② Punguza mwingiliano wa protini, sukari, lipids na macromolecules nyingine
③ Kusiwe na kutengenezea kikaboni au ukolezi mkubwa wa ayoni za chuma unaoweza kuzuia kimeng'enya katika sampuli za asidi ya nukleiki.
④ Uchafuzi wa RNA na asidi nucleic nyingine unapaswa kuondolewa wakati wa kutoa DNA, na kinyume chake.
Muda wa kutuma: Nov-24-2022
